‘Tim ‘MYCO-GRAPE’ sudjelovao je na prvoj EU-GREEN konferenciji u Vodicama (Hrvatska), održanoj 24. svibnja. Predstavili smo poster “Arbuskularne mikorizne gljive i promjene parametara izmjene plinova na vinovoj lozi (Vitis vinifera L.) uzrokovane virusnom infekcijom”. Konferencija je bila savršeno vrijeme za susret s kolegama i uspostavljanje novih kontakata.’
Tijekom zimskog perioda 2022., dr. sc. Tomislav Radić posjetio je Laboratorij za biologiju interakcija biljaka, kojeg vodi dr. sc. Raffaella Balestrini na Institutu za održivu zaštitu biljaka u Torinu, Italija. Tamo je tijekom tri tjedna pod vodstvom stručnjaka stekao metodološka znanja u određivanju ekspresije gena vezanih za odgovor biljke na mikorizni status. Dr. sc. Radić će stečena znanja i vještine prenijeti svom matičnom timu na Institutu za jadranske kulture gdje će se raditi na uvođenju metodologije ekspresije gena u rutinsku uporabu na projektu Myco Grape u svrhu razumijevanja interakcije vinove loze i mikroorganizama.
Doktorand Emanuel Gaši pohađao je trotjednu obuku koja se održala od 28. studenog do 16. prosinca 2022. u Laboratoriju za funkcionalnu genomiku, Instituta za održivu zaštitu biljaka u Torinu, Italija. Pod vodstvom dr. Giorgia Gambina stekao je znanja o detekciji i relativnoj kvantifikaciji virusa u različitim tkivima vinove loze primjenom kvantitativne PCR metodologije u stvarnom vremenu. Stečena znanja će biti primijenjena na matičnom institutu u daljnjem radu sa qPCR uređajem u stvarnom vremenu nabavljenom u okviru “MYCO GRAPE” projekta.
U petak, 30. rujna 2022., održana je Europska noć istraživača. U Marmontovoj ulici, posjetitelji su mogli otkriti zanimljive informacije o mikrobiološkom svijetu koji oblikuje život vinove loze. Posjetiteljima smo pokazali simptome virusnih bolesti loze, mikorizne gljive na korijenu loze, ali i puno drugih interaktivnih sadržaja prikladnih za sve uzraste.
Prije no što se loza počela buditi iz “zimskog sna”, stručnjaci u navrtanju posjetili su naš staklenik i nacijepili virusom inficirane biljne materijale na bezvirusne vinove loze metodom “chip budding”. Uspješnost prijenosa virusne infekcije ćemo ispitati za dva mjeseca.
Nakon cijepljenja, tegle su razmještene na mjesto na kojem će provesti ostatak trajanja eksperimenta.
Izgled loza nakon cijepljenja
Priprema staklenika za nacjepljivanje
Razmještaj tegli u grupe s 13 tretmana
Vinova loza nacijepljena s inficiranim materijalom
Metodom RT-PCR utvrdili smo prisutnost virusnih izolata u vinovoj lozi koju ćemo koristiti kao izvor infekcije za naše loze u stakleniku. Ispitano je nekoliko loza iz vinograda i izabrane su jedinke koje sadrže jedan virus (GLRaV-3) i jedinke koje sadrže mješavinu pet virusa (GFkV, GVA, GLRaV-3, GLRaV-2 i GPGV). Ispitane vinove loze će poslužiti u sljedećoj fazi postavljanja eksperimenta – infekciji odabranih tretmana sa predviđenim virusnim inokulumom.
GPGV prisutan u biljkama s kombiniranom infekcijom (MIX)
Dokazana prisutnost kombinacije virusa u “MIX” jedinkama vinove loze
Prisutnost samo jednog virusa (GLRaV-3) u jedinkama vinove loze
U sklopu predavanja koja organizira Institut za jadranske kulture “Predavanja petkom u 13”, dr. sc. Tomislav Radić predstavio je istraživački projekt Hrvatske zaklade za znanost: “Potencijal arbuskularne mikorize da mijenja obranu vinove loze od virusa”. Dr. Radić je svojoj publici približio pojam arbuskularne mikorize, upoznao ih sa ustrojem eksperimentalnog dijela projekta, istaknuo važnost ove teme na globalnoj i regionalnoj skali i dao odgovore na brojna zanimljiva pitanja koja su se pojavila tijekom rasprave.
U jedinkama vinove loze koje smo inokulirali mikoriznom gljivom Rhizophagus irregularis, provjerili smo uspješnost kolonizacije korijena. Mikroskopijsko kvantificiranje smo proveli primjenom svjetlosnog mikroskopa. Sa zadovoljstvom možemo reći kako su gotovo sve jedinke vinove loze kolonizirane, a stopa kolonizacije u prosjeku je veća od 90 %. Ovaj set biljaka je spreman za sljedeću fazu eksperimenta.
Na fotografijama plavo su obojane hife, vezikule i arbuskule, strukture arbuskularne mikorizne gljive Rhizophagus irregularis
U razdoblju od 19. do 22. rujna dr. Raffaella Maria Balestrini, suradnica na projektu, je na Institutu za jadranske kulture održala internu metodološku radionicu o određivanju ekspresije odabranih gena na qPCR uređaju. Na radionici smo s realnim uzorcima prošli kroz sve korake koji su potrebni za uspješnu relativnu kvantifikaciju ekspresije gena. Uvod u metodologiju ovog tipa analiza će biti od velike koristi u daljnjem napretku projekta.
U prostorijama Instituta za jadranske kulture u Splitu, 16. i 17. rujna održali smo uvodni sastanak projektnog tima. Voditelj projekta je suradnicima iz Slovenije, Italije i Hrvatske predstavio ciljeve projekta, detaljan projektni plan i pojedinačne aktivnosti suradnika. Raspravljalo se o postavkama istraživanja, ali ponajviše o aktivnostima koje su pred nama. U ugodnoj atmosferi, izmjenjivale su se ideje i prijedlozi koji će zasigurno pomoći u uspješnoj realizaciji projekta.
Dr. sc. Raffaella Maria Balestrini je 17. rujna održala predavanje pod nazivom „AM fungi and grapevine: from biodiversity to functional aspects“, na kojem je predstavila vrijedna znanja o interakciji mikoriznih gljiva s vinovom lozom, upotpunjena vlastitim rezultatima dobivenim kroz dugogodišnje iskustvo u istraživanjima arbuskularne mikorizne simbioze.
Radujemo se nastavku suradnje. Saluti! Na zdravje! Živjeli!